GAPDH、β-actin、Tubulin三大常见内参，你选对了吗？

在Western blot实验中，GAPDH、β-actin和Tubulin是出镜率较高的三种内参。但它们并非“万-能钥匙"，而是各自有适用场景和限制条件，本文将针对这三种常用内参进行解读。

1. GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）

l 分子量：约36 kDa

l 亚细胞定位：细胞质

l 特点：糖酵解关键酶，表达量高，在多数常规实验中稳定性好。

l 慎用场景：缺氧、糖尿病、细胞增殖状态改变等条件下，其表达可能发生波动。

2. β-actin（β-肌动蛋白）

l 分子量：约42 kDa

l 亚细胞定位：细胞骨架（主要胞质）

l 特点：在绝大多数真核细胞中广泛且稳定表达，适用于全细胞和胞质样品。

l 慎用场景：脂肪组织、肌细胞分化、细胞骨架重组时，表达量可能变化。

3. α-tubulin / β-tubulin（微管蛋白）

l 分子量：约55 kDa

l 亚细胞定位：微管网络（胞质）

l 特点：结构蛋白，表达稳定，分子量适中。

l 慎用场景：细胞周期、抗有丝分裂药物处理、耐药性研究中，表达可能存在差异。

选内参的简单方法

l 常规细胞系全蛋白：三种均可，优先验证稳定性。

l 特殊处理或病理模型：避开已知波动内参，或增加一种内参作对照。

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